O16 La activación de NRF2 por el compuesto A (CPDA) protege a las células-ß de la injuria inflamatoria mediada por citoquinas - Andreone, Luz; Sétula, Carolina; Assad, Juan Manuel; Perone, Marcelo Javier (Revista de la Sociedad Argentina de Diabetes, 2023)
Introducción: el desarrollo del proceso autoinmune durante la diabetes tipo 1 (DM1) contribuye a la insulitis; en este contexto, el estrés de las células-ß y su posterior deficiencia en la secreción de insulina preceden a los signos clínicos de la enfermedad. La hiperglucemia desencadena la producción de especies reactivas de oxígeno (ROS) mitocondriales que superan la capacidad antioxidante de las células-ß conduciendo al estrés oxidativo. El microambiente inflamatorio del islote contribuye a la activación del estrés oxidativo y del retículo endoplásmico (RE) resultando en la disfunción y muerte de las células-ß. El factor de transcripción Nrf2 regula la expresión de genes citoprotectores en respuesta al estrés oxidativo, su inducción es necesaria para la fisiología normal de la célula-ß. Hemos reportado que el CpdA regula células inmunes clave en la respuesta inmune e inflamatoria y en la insulitis, linfocitos T y células dendríticas. También observamos que el CpdA disminuye el estrés de RE inducido por citoquinas inflamatorias (IL-1ß+IFN-g; CYT) en células-ß y que la administración in vivo del CpdA retarda la aparición de hiperglucemia en un modelo murino de diabetes autoinmune. El desarrollo de nuevos agentes con acción antiinflamatoria e inmunomoduladora y potencial protector dirigido a la señalización disfuncional de las células-ß posee interés clínico en la diabetes. Objetivos: explorar el efecto del CpdA sobre la vía de señalización de Nrf2 y el estrés oxidativo inducido por CYT en las células-ß. Materiales y métodos: como modelo experimental utilizamos la línea celular de insulinoma de rata (INS-1E). Fórmula química del CpdA: cloruro de 2-(4-acetoxifenil)-2- cloro-N-metil-etilamonio. Se utilizó un plásmido reportero (ARE-LUC) para la evaluación de la actividad transcripcional de Nrf2 (luminometría), RT-qPCR (Sybr Green) para el análisis de la expresión de ARNm, WB para el análisis de la expresión de proteínas, kit comercial basado en DCFDA para evaluar ROS (fluorometría), análisis de viabilidad celular por MTT y ELISA para insulina. Resultados: el CpdA (10 µM) estimuló la actividad transcripcional de Nrf2 induciendo la expresión del ARNm de enzimas antioxidantes (NQO1, HMOX-1 y Txnrd1) en células INS-1E (p<0,05 vs control). Consecuentemente, el CpdA redujo la generación de ROS inducida por CYT (p<0,01 vs. control). La acción del CpdA contrarrestó el aumento del índice apoptótico, cuantificado mediante la relación de la expresión de Bax/Bcl-2 y de la expresión del ARNm de DP5 (death protein-5), ambos parámetros inducidos por CYT (p<0,05 vs control). El CpdA protegió a las células INS-1E de la reducción de la viabilidad inducida por CYT y mantuvo la secreción basal de insulina (p<0,05 vs control). Conclusiones: el tratamiento con CpdA activa la vía de Nrf2 disminuyendo el estrés oxidativo y la apoptosis celular, y manteniendo la secreción basal normal de insulina cuando las células-ß son expuestas in vitro a un entorno inflamatorio inducido por CYT. Actualmente, diversos experimentos continúan en curso en nuestro laboratorio para dilucidar el potencial terapéutico del CpdA en la diabetes autoinmune.